A fase mobile hè equivalente à a fase liquida di sangue, è ci sò parechje cose à prestu attenzione durante l'usu. À mezu à elli, ci sò qualchi "pitfalls" chì deve esse attentu.
01. Misura u pH di a fase mobile dopu l'aghjunghje solvente urgànicu
Se misurate u pH cù un additivu urgànicu, u pH chì avete da esse diversu di prima di aghjunghje u solvente urgànicu. Tuttavia, u più impurtante hè di esse cunsistenti. Sè sempre misurà u pH dopu l'aghjunghje u solvente urgànicu, assicuratevi di dichjarà i vostri passi in u metudu chì utilizate per chì l'altri seguiranu u stessu metudu. Stu metudu ùn hè micca 100% precisu, ma almenu mantene u metudu consistente. Questu pò esse più impurtante di ottene un valore di pH precisu.
02. Nisun buffer usatu
U scopu di un buffer hè di cuntrullà u pH è impediscenu di cambià. Parechji altri metudi cambianu u pH di a fase mobile, chì pò causà cambiamenti in u tempu di ritenzione, a forma di punta è a risposta di punta.
L'acidu formicu, TFA, etc. ùn sò micca buffers
03. Ùn aduprà buffer in u range di pH normale
Ogni buffer hà una larghezza di intervallu di unità di pH 2, in quale furnisce a megliu stabilità di pH. I tamponi fora di sta finestra ùn furnisce micca una resistenza efficace à i cambiamenti di pH. O aduprate un buffer in a gamma curretta, o sceglite un buffer chì copre u intervallu di pH chì avete bisognu.
04. Aghjunghjite u buffer à a suluzione organica
U mischju di una suluzione di tampone cù una fase urganica pruvucarà assai prubabilmente a precipitazione di u buffer. In parechji casi, ancu s'ellu hè accadutu a precipitazione, hè sempre difficiule di detectà. Ricurdatevi di aghjunghje sempre a suluzione urgànica à a fase aquosa, chì pò riduce assai a chance di precipitazione di buffer.
05. Imbulighjate u gradiente di cuncentrazione da 0% cù una pompa
Pumps dispunibuli oghje ponu effittivamenti mischjà fasi mobile è degas inline, ma micca tutti chì utilizanu u vostru metudu averà una pompa d'alta qualità. Imbulighjate A è B in una solu suluzione è eseguite 100% in linea.
Per esempiu, 950 ml di mistura di partenza organica pò esse preparatu mischjendu cù 50 ml d'acqua. U vantaghju di questu hè chì pò riduce a variabilità trà HPLC è riduce a pussibilità di bolle è precipitazione in u sistema. Hè nutate chì u rapportu di a mistura di a pompa hè 95: 5, chì ùn significa micca chì u tempu di ritenzione pre-mixed in a buttiglia hè ancu 95: 5.
06. Ùn aduprate micca l'acidu mudificatu currettu (base) per cambià u buffer
Aduprate solu l'acidu o a basa chì forma u salitu di buffer chì site aduprate. Per esempiu, un buffer di fosfatatu di sodiu deve esse preparatu cù solu l'acidu fosforicu o l'idrossidu di sodiu.
07. Ùn dichjarà tutte l'infurmazioni nantu à u buffer in u metudu, cum'è aghjunghjendu 5g difosfatatu di sodiu à 1000 ml d'acqua.
U tipu di buffer determina a gamma di pH chì pò esse tamponata. A cuncentrazione necessaria determina a forza di buffer. 5 grammi o fosfatatu di sodiu anidru è 5 grammi di fosfatatu monosodiu monoidratu anu diverse forze di buffer.
08. Aghjunghjite solventi organici prima di verificà
Se u metudu precedente hà utilizatu una suluzione di buffer per a basa B, è u vostru metudu usa una suluzione organica per a basa B, pudete sperà settle u buffer in u tubu di a pompa è a testa di a pompa.
09. Lift a buttiglia è sviutata l'ultima goccia
Ci hè una bona chance chì ùn avete micca abbastanza fase mobile per compie tutta a corsa è a vostra mostra fumarà. In più di a pussibilità di brusgià u sistema di pompa è a colonna, a fase mobile si evaporarà completamente è a fase mobile in cima di a buttiglia cambierà.
10. Utilizà a fase mobile di degassing ultrasonica
U puntu più impurtante hè di assicurà chì tutti i sali di buffer sò dissoluti, ma questu hè u peghju modu di degas è scaldarà rapidamente a fase mobile, facendu chì i cumpunenti organici s'evaporanu. Per risparmià prublemi inutili più tardi, pigliate cinque minuti per filtrà a vacuum a vostra fase mobile.
Tempu di Postu: Aug-27-2024